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優(yōu)缺點(diǎn)或備注 |
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甲醛：從組織學(xué)的觀點(diǎn)來說,甲醛是一種良好的固定劑,它有很多的優(yōu)點(diǎn):1. 組織收縮較少,損傷少,保存固有物質(zhì)好.2. 固定均勻,穿透力強(qiáng).3. 能使組織硬化,增進(jìn)組織彈性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂類物質(zhì).5. 成本較低.
缺點(diǎn):1. 雜質(zhì)含量較多,如甲醇,可鈍化酶類,影響反應(yīng).2. 含有微量甲酸,導(dǎo)致固定液酸變,影響染色.3. 可產(chǎn)生福爾馬林色素,影響觀察.4. 不能固定尿酸和糖類物質(zhì).5. 容易揮發(fā),污染環(huán)境,可導(dǎo)致標(biāo)本干涸.6. 可長(zhǎng)期存在于固定過的組織上.有人做過實(shí)驗(yàn),組織用甲醛固定后在流水中沖洗5小時(shí)后,仍留有相當(dāng)多的甲醛與蛋白質(zhì)相結(jié)合,臨床活檢不用.因此要特別指出的是,在其后的各種技術(shù)操作中,要特別注意到甲醛的存在,必須要想辦法除去它,否則將會(huì)給各種染色造成影響,甚至導(dǎo)致失敗。 |
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1 |
10%緩沖福爾馬林固定液 |
甲醛 100ml |
該固定液是當(dāng)今流行的固定液,因它對(duì)組織固定較好,損傷較少,因?qū)ζ浜蟮母鞣矫嫜芯慷驾^好,尤其是對(duì)免疫組化的染色。 |
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2 |
10%福爾馬林固定液 |
甲醛100 ml
自來水900ml |
這是一種最簡(jiǎn)單的固定液，適合于邊遠(yuǎn)地區(qū)攜帶的固定液，但由于它的單一性，因此，只要有條件的單位都不要求使用這種固定液。 |
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3 |
10%福爾馬林鹽固定液 |
甲醛 100ml |
先將Nacl溶于水，再加入甲醛。這也是一種較為簡(jiǎn)單的固定液，但由于加入Nacl，它是一種重金屬鹽物質(zhì)，加入了它可促進(jìn)和改善染色，增加染色的強(qiáng)度 |
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4 |
Bouin氏固定液 |
苦味酸飽和水溶液 75ml |
該固定液中的冰醋酸，對(duì)膠原纖維等組織有膨脹作用。而甲醛對(duì)組織有收縮作用。兩種試劑的混合使用，用以抵消彼此間的副作用。使組織固定達(dá)到優(yōu)良的固定水平 |
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5 |
醛糖鈣固定液 |
甲醛100ml |
先將蔗糖和乙酸鈣溶于蒸鎦水，后加入甲醛。該固定液對(duì)于做酶的組織化學(xué)的研究效果較好，組織固定后，做冰凍切片，再給予顯示。
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酒精：優(yōu)點(diǎn)：1、 可保存尿酸結(jié)晶和糖原等物質(zhì)。2、 能在任何比例的情況下與水混合，如組織的脫水，切片染色前后都離不開酒精，通常都用95%的工業(yè)酒精來配成60%、70%、80%、90%等不同的濃度來使用。
3、 可溶解苯類物質(zhì)為染色步驟中的橋梁試劑。常規(guī)活檢等切片上的石蠟必須除去，才能進(jìn)行染色，能除去石蠟的物質(zhì)有苯及汽油等，因此稱它為橋梁試劑。4、 能除去切片上的水份，使切片無水化。切片經(jīng)染色后，到無水酒精中已完全無水，這樣處理對(duì)于切片的保存是有好處的，否則，切片將會(huì)褪色。5， 可與其它試劑配成多種的混合固定液，加快固定，它的缺點(diǎn)是：1、 可溶解脂類物質(zhì)，凡要證明組織是否含有脂類和類脂物時(shí)，切不能用含有酒精的固定液去固定組織，也不能用石蠟切片。2、 對(duì)組織收縮較大，不宜作單純固定液。3、 滲透力不強(qiáng)。當(dāng)用酒精固定組織時(shí)，組織表面很快就被固定，并形成了一層蛋白膜，這層膜可阻擋固定液向里滲透，造成了中間組織固定不佳的現(xiàn)象。4、 可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡經(jīng)酒精固定的組織，核的染色都不好。5、 可脫去切片上已著染的各種顏色，切片經(jīng)染色后，一是必須洗去多余的染液，二是必須脫去切片上的水。在用酒精洗切片時(shí)，必須仔細(xì)地掌握顯微鏡下觀察，還要掌握酒精的濃度，低濃底的酒精脫色力強(qiáng)，稍不注意，便可脫去切片上大部分的顏色。切片脫水時(shí)，要較快地通過低濃度的酒精，以免使已著染的顏色被脫去。
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6 |
Carnoy氏固定液 |
氯仿 300ml |
該固定液固定組織快速，在固定的同時(shí)兼有脫水的作用。溶液中的氯仿和酒精，對(duì)組織的收縮較厲害，但應(yīng)用了冰醋酸，這種現(xiàn)象便被中和去 |
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7 |
AF固定液 |
甲醛 100 ml |
這種固定液的作用與上液有相似之處，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脫水用具不能使用銅制的脫水盒，因冰醋酸跟銅離子起反應(yīng)，生成醋酸銅，這種物質(zhì)可沉淀于組織間，可破壞組織中的抗原，造成免疫組化檢測(cè)的失敗。應(yīng)用時(shí)應(yīng)多加注意 |
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冰醋酸:優(yōu)點(diǎn)有：1、 能迅速固定染色質(zhì)，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均勻，對(duì)于染色質(zhì)的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明礬蘇木素和伊紅時(shí)，常常需加入一定量的醋酸，以促進(jìn)染色。2、 能使組織尤其是富含纖維的組織膨脹。各種固定液對(duì)組織都有收縮的作用，尤其是對(duì)富含纖維的組織。而它不但不會(huì)使組織收縮，而且還會(huì)令許多組織發(fā)生膨脹的作用。不足之處：1、 不能作為單一的固定劑。
2、 不能凝固蛋白質(zhì)，不能保存白細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含血鐵黃素等。 |
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8 |
Zenker氏固定液 |
重鉻酸鉀 25G
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先將重鉻酸鉀和升汞溶于水中，尢其是重鉻酸鉀，應(yīng)用熱水或加溫的方法將其溶解，然后過濾貯存于帶蓋的玻璃瓶中以防失效。臨用時(shí)，取貯存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。應(yīng)用該固定液固定的組織，一般不要超過24h，取出組織，流水沖冼12小時(shí)以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必須用碘除去汞鹽的沉著。應(yīng)用該固定液的組織，細(xì)胞核及細(xì)胞漿染色十分清晰，特別是要顯示骨骼肌的橫紋時(shí)，應(yīng)用本液可獲得滿意的結(jié)果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存細(xì)胞顆粒，紅細(xì)胞及含鐵血黃素。 |
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9 |
Flemming氏液 |
2%酸水溶液 200ml |
該液中的奧酸對(duì)脂肪組織既有固定作用，又有染色作用，對(duì)有髓神經(jīng)纖維也有固定兼染髓鞘的作用。如果做HE的染色，該液不適合。應(yīng)用該液固定的組織，切片不能太大過厚，一般1-2毫米厚固定時(shí)間1-3天，后經(jīng)水洗，保存于80%酒精中，除上述兩液體外，還有Bouin氏液和Carnoy氏液等。 |
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重鉻酸鉀:? 它的優(yōu)點(diǎn)是：1、 能固定脂肪及類脂物。2、 為髓鞘及嗜鉻細(xì)胞優(yōu)良的媒染劑。3、 可配成多種的混合固定液足之處有：1、 不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白質(zhì)。2、 具有毒性及產(chǎn)生高溫。在配制液體時(shí)，如清洗劑，當(dāng)加入硫酸時(shí)，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣體，應(yīng)特別注意。3、 它不能長(zhǎng)期固定組織，經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中。 |
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10 |
Helly氏液 |
重鉻酸鉀 25g |
臨用時(shí)加入甲醛，因其加入后于24小時(shí)后可發(fā)生沉淀而失效，因用時(shí)應(yīng)特別注意。該液是白細(xì)胞顆粒的優(yōu)良固定劑，因此凡為白細(xì)胞或造血器官如骨髓，脾臟及患先天性梅毒之肝臟等，可用此液固定。此液原配方要求加入硫酸鈉，但據(jù)我們經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，硫酸鈉在液中對(duì)組織無任何作用，故省去 |
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11 |
Orth氏液 |
重鉻酸鉀 20g |
該液固定組織較緩慢，不適合于作臨床的活檢固定液，4毫米厚的組織固定時(shí)間需36-72小時(shí)，該液對(duì)于染色質(zhì)的固定好，顯示清晰，但可溶解部分紅細(xì)胞和含鐵血黃素。
重鉻酸鉀的不足之處有：
1、 不能沉淀蛋白質(zhì)，它必須和醋酸配成混合固定液，方能發(fā)揮作用，產(chǎn)生鉻酸，沉淀蛋白質(zhì)。
2、 具有毒性及產(chǎn)生高溫。在配制液體時(shí)，如清洗劑，當(dāng)加入硫酸時(shí)，可產(chǎn)生很高的溫度，并揮發(fā)出刺鼻的氣體，應(yīng)特別注意。
3、 它不能長(zhǎng)期固定組織，經(jīng)它固定的組織應(yīng)充分水洗后保存于80%酒精中 |
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